过氧化氢浓度测定

过氧化氢浓度测定

过氧化氢浓度测定方法如下：

一、二甲酚橙（xylenol orange）法

原理：过氧化氢氧化二价铁离子产生三价铁离子，二甲酚橙（xylenol orange）高选择性的结合三价铁离子形成有色（紫色）产物，可用比色法在580nm处测定。从而实现对过氧化氢浓度的测定。

由于二甲酚橙（xylenol orange）作为一种金属离子络合指示剂，与三价铁离子的结合有很高的选择性，也就是该方法有很好的特异性。同时该反应需要在酸性条件下进行，可毁兆以消除很多物质的干扰。

二、硫酸钛比色法

原理：H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。

该方法原理简单易懂，但样本处理需要自备丙酮用来破碎细胞、匀浆组织和稀释液体样本。丙酮易挥发，而且易燃有毒，给操作带来一定困难，需要做好防护措施。

三、探针法

原理：在辣根过氧化物酶（HRP）存在的条件下，特异的 探针与过氧化氢反应，生成有色产物在570nm有最大光吸收，也禅余腊可产生红色荧光（Ex/Em=535/587 nm）。比色法与荧光法灵敏度不同，需要配制不同的标准曲线。

该方法需要用到特异性的荧光探针，反应原理较前面2种复杂，但灵敏度很高，在荧光法中灵贺滑敏度可达40 nM。

四、过氧化物酶底物法

原理：用一种独特的过氧化物酶底物测定溶液和细胞提取物中的过氧化氢 ，在辣根过氧化物酶（HRP）存在的条件下，过氧化氢氧化无色的过氧化物酶底物，产生强烈的蓝色。在 650nm有特征吸收。